En effektiv og billig proces til klaring og ultrafiltrering af gær, der udtrykker rekombinante proteiner
Gærekspression af eksogene gener kan ikke kun producere rekombinante proteiner og peptider, antistoffer og vacciner, cytokiner, vækstfaktorer, hormoner og andre bioaktive stoffer, men kan også bruges til at producere industrielle enzymer, funktionelle fødevarer og biologiske materialer, som har brede anvendelsesmuligheder .
Gærekspressionssystemet indbefatter to almindeligt anvendte ekspressionssystemer, det vil sige saccharomyces cerevisiae ekspressionssystem og metanotrofisk gærekspressionssystem. Methanolgærekspressionssystemet er det mest udbredte gærekspressionssystem på nuværende tidspunkt, og Pichia er det mest almindeligt anvendte, som kan bruge methanol som kulstof og energi. Derudover er der Hansens gær, Sphaeroides og så videre.
Uanset hvilken slags gærekspressionssystem, dets nedstrøms separations- og oprensningsprocesser ligner hinanden, og det specifikke procesflow tager gærekspression af rekombinante proteiner og polypeptidlægemidler som et eksempel.
Guidling mikrofiltreringsmembrankassetter anvender åben flowkanal og tangentiel flowfiltreringstilstand, som effektivt kan behandle kompleks fødevæske såsom gærfermenteringsvæske og E. coli-krakningsvæske ved høj hastighed og kan sikre lineær amplifikation fra lille test til produktionsskala. Kompakt modulopbygget design, enkel rørledningsforbindelse, uafhængighed og læsbarhed af systemet kan beskytte operatører og forhindre biologisk forurening. Og ingen vedligeholdelses- og rengøringsverifikation. Derfor er den meget velegnet til afklaringstrinnet med tidlig nedstrømsbehandling.
Hovedformålet med UF/DF-processen er at fjerne urenheder og fortrænge buffere. Guidling ultrafiltreringsmembrankassette har god homogenitet af membranporestørrelse og stærk hydrofilicitet, hvilket kan give membranen højere flux og lavere proteinadsorption, og optimeret flowkanaldesign, med mindre trykfald, let materialeoverførsel og væsentligt forkorte filtreringstiden. Desuden er produktserien komplet og fleksibel til at imødekomme behovene for forskellige applikationer i forskellige skalaer. Derfor er den meget velegnet til UF/DF-trinnet i downstream-behandling.
Følgende er anvendelsessagen for Guidling membrankassettei gærekspression af rekombinante proteiner.
Mikrofiltreringsafklaring
Vi brugte {{0}},11 kvadratmeter 0,22μm poremembrankassette til at klare 1,5L gærfermenteringsvæske (målproteinmolekylvægt 42-55 KD) ved mikrofiltrering. I hele processen med mikrofiltrering blev genvindingshastigheden af målprotein, turbiditetsændring og membranfluxudtømning undersøgt.
0-17min er koncentrationsprocessen, 17-32min er vaske- og filtreringsprocessen. Under hele mikrofiltreringsprocessen steg TMP gradvist, væskeindløbshastigheden forblev uændret, og den gennemsnitlige materialeflux var 45LMH.
Væskens turbiditet var 600NTU før mikrofiltrering og 8NTU efter mikrofiltrering, og turbiditeten ændrede sig tydeligt.
Resultaterne viste, at udbyttet af målprotein var > 90%. Guidling Technology 0,22μm membrankassette er stabil og velegnet til dette anvendelsesscenarie.
Ultrafiltreringskoncentration
Ultrafiltreringskoncentration af 1,5 l klaret væske (målproteinmolekylvægt 42-55kd) blev udført under anvendelse af 0.11 kvadratmeter 10kd membrankassette. I hele processen med ultrafiltrering blev genvindingshastigheden for målprotein, membranfluxudtømning og vandfluxgenvindingshastigheden undersøgt.
Før og efter brug kan genvindingsgraden af membranen nå 90%.
0-15min er koncentrationsprocessen, 15-18min er væskeudvekslingsprocessen. Under hele ultrafiltreringsprocessen steg TMP gradvist, væskeindløbshastigheden forblev uændret, og den gennemsnitlige materialeflux var 50LMH.
Resultaterne viste, at målproteinet var fuldstændigt fanget. Guidling Technology 10kd membrankassetter kan køre stabilt og er velegnede til dette applikationsscenarie.
De fleste af de rekombinante proteiner udtrykt af gær var ikke højt udtrykt. Turbiditeten af den filtrerede væske var tydeligvis reduceret, og proteingenvindingshastigheden var højere. Fordi den efterfølgende kromatografiske tid er for lang, vil det forårsage uønskede virkninger på proteinet, for at forkorte den kromatografiske prøveudtagningstid kan et trin med ultrafiltreringskoncentration tilføjes, og målproteinet kan koncentreres hurtigt efter prøven, hvilket kan opnå formålet med at spare tid, reducere fyldstofvolumen og dermed reducere produktionsomkostningerne.
Guidling Technology-mikrofiltreringsmembrankassetter kan generelt reducere turbiditeten af fødevæsken til mindre end 20NTU, hvilket fuldt ud opfylder behovene for efterfølgende ultrafiltrering og kromatografi. Ultrafiltreringsgenvindingsgraden for ultrafiltreringsmembrankassetter vil variere på grund af forskellige materialer, den generelle genvindingsgrad kan nå op på 90-95%.
Guidling Technology byder dig velkommen til at anmode om testsæt til relateret evaluering.
Om Guidling
Guidling Technology er en national højteknologisk virksomhed med fokus på biofarmaceutiske produkter, cellekultur, oprensning og koncentration af biomedicin, diagnose og industrielle væsker. Vi har med succes udviklet centrifugalfilterenheder, ultrafiltrerings- og mikrofiltreringskassetter, virusfilter, TFF-system, dybdefilter, hule fibre osv., som fuldt ud opfylder anvendelsesscenarierne for biofarmaceutika, cellekultur og så videre. Vores membraner og membranfiltre bruges i vid udstrækning til koncentrering, ekstraktion og adskillelse af forfiltrering, mikrofiltrering, ultrafiltrering og nanofiltrering. Vores mange produktlinjer, fra små laboratoriefiltrering til engangsbrug til produktionsfiltreringssystemer, sterilitetstestning, fermentering, cellekultur og mere, opfylder behovene for test og produktion. Guidling Technology ser frem til at samarbejde med dig!
