SP Strong Kation Exchange Membran Chromatography

Introduktion til CM Weak Ion-udvekslingsmembrankromatografiprodukter

 

1. Overblik

CM svag kation-udvekslingskromatografi er en oprensningsteknologi, hvor carboxymethylgrupper bindes til membranen for at danne et funktionelt modul. Adskillelse opnås baseret på forskellene i ladningsegenskaberne og ladningsdensiteten af ​​forskellige biomolekyler. Da de fleste biologiske makromolekyler indeholder carboxyl- eller hydroxylgrupper, kan deres ladningsegenskaber og størrelse justeres ved at ændre pH-værdien af ​​bufferopløsningen. Efter at biomolekylerne binder til membranmodulet, der bærer modsatte ladninger, udføres eluering ved at ændre ionstyrken eller pH af den mobile fase. Molekyler med svagere bindingsaffinitet elueres først, mens dem med stærkere bindingsaffinitet elueres senere, hvorved der opnås effektiv adskillelse.

 

2. Produktfordele

2.1 Hurtig og effektiv: Høj bindingskapacitet kan opnås ved strømningshastigheder op til 40 gange hurtigere end konventionel harpiks-baseret kromatografi. Sammenlignet med traditionel pakket-kromatografi kan membrankromatografi forkorte procestiden med 30-40 gange. Den typiske driftsstrøm er 10 MV/min.

2.2 Høj bindingseffektivitet: Membrankromatografi viser høj belastningskapacitet og høje strømningshastigheder under lavt trykfaldsforhold, hvilket gør det muligt at fange ladede biomolekyler i en enkelt passage gennem modulet.

2.3 Skalerbar og fleksibel: Det komplette udvalg af membrankromatografiprodukter kan imødekomme forskellige behov for biomakromolekylebehandling, der dækker stadier fra procesudvikling til stor-produktion. Kapseldesignet tillader engangs-applikationer eller kan rengøres og genbruges efter behov.

2.4 Øget produktivitet: Det kompakte design minimerer faciliteternes fodaftryk. Ved at eliminere kolonnepakning, rengøring, rengøringsvalidering og kolonneopbevaringstrin kan behandlingen begynde efter ækvilibrering med et relativt lille volumen buffer. Uden behov for kolonnepakning, rengøring eller opbevaring kan arbejdsomkostningerne reduceres med op til mere end 50 %.

 

3 tekniske parametre

3.1 Konstruktionsmaterialer

	Laboratorie skala	lille skala	Pilot skala	Produktionsskala
Membran volumen	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranstøttestruktur	Polypropylen
Membranhus	Polypropylen
O ring	Silikonegummi

3.2 Driftskarakteristika

	Laboratorie skala	lille- skala	Pilot- skala	Produktionsskala
Membran volumen	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Anbefalet flowhastighed	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Maksimal driftstemperatur	35 grader
Maksimalt driftstryk	3 bar (25 grader)
Maksimal trykforskel	3 bar (25 grader)
Opbevaringsforhold	20% vandig ethanolopløsning

Sammenlignet med konventionelle medier er levetiden for CM-membrankromatografi sammenlignelig med den for CM-agarosegel 6FF.

Figur 1. Ændringer i belastningskapaciteten af ​​CM-membrankromatografi efter flere anvendelser i lysozymtestning.

Derudover evaluerede vi fjernelseseffektiviteten af ​​værtscelleproteiner og nukleinsyrer ved membrankromatografi. Resultaterne er vist nedenfor.

Tabel 1. Fjernelseshastigheder af DNA og værtscelleproteiner i CHO-udtrykt IgG-materiale ved hjælp af CM-membrankromatografi

En række eksperimenter viste, at CM-membrankromatografi effektivt kan fjerne kontaminanter og samtidig opretholde en høj genvindingshastighed af mål-IgG

	DNA				HCP
	IgG-gendannelse	Indhold (pg/mg af IgG) ved RT PCR		Fjernelsesfaktor	Indhold(ng/mg af IgG) af Elisa		Fjernelsesfaktor
Løbe	%	Før Q-membran	Efter Q Membran	Log	Før Q-membran	Efter Q Membran	Log
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Ved at bruge Gudiling CM membrankromatografi sammenlignet med andre mærker, er lastekapacitetsdataene vist nedenfor.

Belastningskapacitet (mg/ml)	Jingbiao 1	Guidning
Lysozym	18	23
Trypsin	17	20

Tabel 2. Indlæsningsevne af forskellige proteiner i vores produkt sammenlignet med konkurrerende produkter

En samlet vurdering viser, at vores lastekapacitet er sammenlignelig med importerede produkters.

Figur 2. Belastningskapacitetstest af CM-membrankromatografimodulet under anvendelse af lysozym som standardprotein.

Den dynamiske lastekapacitet blev også sammenlignet med importerede produkters. Verifikation viste, at lysozym kunne elueres ved hjælp af 160 mM NaCl, hvilket muliggør effektiv indfangning af de fleste målproteiner.

Gennem optimering af forskellige elueringsbetingelser fandt vi ud af, at membrankromatografi udviser elueringsadfærd svarende til agarosegelkromatografi, hvor proteinrenheden varierer betydeligt under forskellige saltkoncentrationer. I praktisk F&U og produktion er det nødvendigt kvantitativt at bestemme ligevægtselueringsbetingelserne for at opnå målprotein med høj-renhed.

 

4. Typiske ansøgningssager

• Fjernelse af DNA, vira og værtscelleproteiner
• Indfangning af plasmider, vira og proteiner, samt oprensning af oligonukleotider
• Affarvning af gærfermenteringsbouillon og høj-proteinindfangning

 

5. Driftsprocedure / Workflow

5.1: Forberedelse og montering af udstyr:

5.1.1: Installer membrankromatografimodulet på et AKTA-kromatografisystem. Installationsmetoden ligner pakkede-lejekromatografimedier; sørg for, at flowretningen følger pilen markeret på modulet. Modulet kan tilsluttes ved hjælp af Luer-stik eller klemmestik.

5.1.2 Indstil indløbsflowhastigheden til 5–10 MV/min, og brug ækvilibreringsbuffer til at skylle luft ud af modulet. Fortsæt skylningen, indtil der ikke observeres bobler ved udløbet, og tilslut derefter permeatudløbet til kromatografisystemet.

5.2.:Forberedelse til-brug

5.2.1: Indstil indløbsflowhastigheden til 5–10 MV/min og udfør forbehandling med 0,5 M NaOH i mere end 5 MV for at sikre, at membranen når ligevægt.

5.2.2:Under de samme strømningshastighedsforhold skal du udføre for-behandling med 1 M NaCl i mere end 5 MV for at sikre, at membranen når ligevægt.

5.3. Kromatografi proces

5.3.1 Indstil indløbsflowhastigheden til 5-10 MV/min og udfør for-behandling med ækvilibreringsbuffer i mere end 5 MV, indtil membranen når ligevægt.

5.3.2 Efter 0,22 μm for-filtrering påfyldes prøven på kolonnen og fortsættes, indtil hele prøven er påført, eller kromatografibelastningskapaciteten er nået.

5.3.3 Vask med ækvilibreringsbuffer i mere end 10 MV, indtil UV-værdien falder til basislinjen.

5.3.4 I henhold til procesdesignet, påfør gradienteluering eller et lineært elueringssystem, og opsaml fraktioner i segmenter efter behov.

5.4 CIP Post-behandling – CIP (Clean-in-Place) for membrankromatografisystem.

5.4.1 Indstil indløbsflowhastigheden til 5–10 MV/min, og behandl med 1 M NaOH i mere end 10 MV, indtil UV-værdien falder under basislinjen.

5.4.2 Efter 30 minutters cirkulerende vask, skyl med vand, indtil pH er mellem 7 og 8, skift derefter til 20 % ethanol og fortsæt med rengøring, indtil ledningsevnen forbliver næsten uændret.

5.5 Membrankromatografilagring

Efter brug og afslutning af CIP kan membranmodulet fjernes og opbevares ved iblødsætning i 20 % ethanol eller opbevares online ved stuetemperatur i en opløsning indeholdende 20 % ethanol. 20 % ethanolopløsningen bør efterses og udskiftes regelmæssigt.

 

6,Ordreinformation

CM--type svagt kationbyttermembrankromatografikapselfilter

	Laboratorie skala	Lille skala	Pilot skala	Produktionsskala
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Membran område	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populære tags: sp stærk kationbyttermembrankromatografi, Kina, leverandører, producenter, fabrik, engros, bulk, på lager, gratis prøve