CM svag ion-udvekslingsmembrankromatografi

SP Strong Kation Exchange Membran Chromatography Produktintroduktion 

 

2. Produktfordele

Hurtig og effektiv Høj bindingskapacitet kan opnås ved strømningshastigheder op til 40 gange hurtigere end traditionel harpikskromatografi. Sammenlignet med konventionel-harpiksbaseret kromatografi kan procestiden ved hjælp af membrankromatografi reduceres med 30-40 gange. Den typiske driftsstrøm er omkring 10 MV/min.

2.2 Høj bindingseffektivitet Membrankromatografi udviser høj bindingskapacitet og høje flowhastigheder ved lavt trykfald, hvilket gør det muligt at fange ladede biomolekyler i en enkelt passage gennem modulet.

2.3 Skalerbar og fleksibel Hele udvalget af membrankromatografiprodukter kan opfylde de forskellige behov for biomolekyleoprensning, og dækker applikationer fra procesudvikling til stor-produktion. Kapseldesignet giver mulighed for engangs-brug eller kan rengøres og genbruges efter korrekte rengøringsprocedurer.

2.4 Forbedret produktivitet Det kompakte design minimerer faciliteternes fodaftryk. Ved at eliminere operationer såsom kolonnepakning, rengøring, rengøringsvalidering og kolonnelagring kan behandlingen begynde efter simpel ækvilibrering med relativt mindre buffer. Da der ikke er behov for kolonnepakning, rengøring eller opbevaring, kan arbejdsomkostningerne reduceres med mere end 50 %.

 

 

3 tekniske parametre

3.1 Konstruktionsmaterialer

	Lab skala	lille skala	pilotskala	produktionsskala
membranvolumen	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranstøttestruktur	Polypropylen
membranhus	Polypropylen
O ring	Silikone

3.2 Driftskarakteristika

	Lab skala	lille skala	pilotskala	produktionsskala
membranvolumen	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Anbefalet flowhastighed	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Maksimal driftstemperatur	35 grader
Maksimalt driftstryk	3 bar (25 grader)
Maksimal trykforskel	3 bar (25 grader)
Opbevaringsforhold	20% ethanolaqueoussløsning

Sammenligning viser, at levetiden for SP-membrankromatografi er sammenlignelig med den for SP Sepharose 6FF.

Figur 1. Ændringer i bindingskapacitet af SP-membrankromatografi efter flere anvendelser testet med lysozym

Derudover evaluerede vi membrankromatografien for dens effektivitet til at fjerne værtscelleproteiner og nukleinsyrer. Resultaterne er som følger:

	DNA				HCP
	IgG-gendannelse	Indhold (pg/mg af IgG) ved RT PCR		Fjernelsesfaktor	Indhold(ng/mg af IgG) af Elisa		Fjernelsesfaktor
Løbe	%	Før Q-membran	Efter Q Membran	Log	Før Q-membran	Efter Q Membran	Log
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Tabel 1. DNA- og værtscelleproteinfjernelseshastigheder i CHO-udtrykt IgG-materiale ved brug af SP-membrankromatografi

En række eksperimenter viste, at SP-membrankromatografi effektivt kan fjerne forurenende stoffer og samtidig opretholde en høj genvindingshastighed af mål-IgG.

Når man sammenligner Gudiling SP membrankromatografi med importerede mærker, er bindingskapacitetsdataene som følger:

Indbindingckapacitet (mg/ml)	Sartorius	PALL	Guidning
Lysozym	25	32	29
Trypsin	22	27	25

Tabel 2. Bindingskapacitet for forskellige proteiner i vores produkt og konkurrerende mærker

En samlet vurdering viser, at vores bindingskapacitet er sammenlignelig med importerede produkters.

Figur 2. Bindingskapacitetstest af SP-membrankromatografimodul ved brug af lysozym som standard

Sammenlignet med dynamisk bindingskapacitet og importerede produkter blev det bekræftet, at de fleste målproteiner kan fanges, når lysozym elueres i 190 mM NaCl.

Gennem forskellige elueringsbetingelser fandt vi ud af, at elueringsprofilerne for membrankromatografi ligner dem for agarosegel, men renheden af ​​proteiner varierer betydeligt ved forskellige saltkoncentrationer. I egentlig forskning og udvikling og produktion er det nødvendigt kvantitativt at bestemme optimale elueringsbetingelser for at opnå målproteiner med høj-renhed.

 

4 Typiske anvendelsessager

Fjernelse af DNA, vira og værtscelleproteiner

Indfangning af plasmider, vira, proteiner og oprensning af oligonukleotider

Fjernelse af pigmenter fra gærfermenteringsbouillon og høj-proteinindfangning

 

5 Brugsprocedure

5.1 Forberedelse og montering af udstyr:

5.1.1: Installer membrankromatografimodulet på et ÄKTA-kromatografisystem ved at følge procedurer svarende til harpikskolonner, og sørg for, at strømningsretningen er på linje med modulets pile og indløbsretningen. Tilslut modulet med enten Luer-låse eller klemme-tilbehør for sikker integration i systemet.

5.1.2 Indstil tilførselsflowhastigheden til5–10 MV/minog afgas modulet ved hjælp af ækvilibreringsbuffer, hvilket sikrer, at spildevandet er fri for luftbobler. Når det er afgasset, tilsluttes permeatudløbet til kromatografisystemet.

5.2:Behandling før-brug:

5.2.1:

Indstil foderflowhastigheden til5–10 MV/minog udføre for-forbehandling med0,5 M NaOH for mere end 5 MV, hvilket sikrer, at membranen når fuld ligevægt.

5.2.2: Udfør for-forbehandling med samme flowhastighed1 M NaCl for mere end 5 MVfor at sikre, at membranen når fuld ligevægt.

5.3 Kromatografiproces

5.3.1 Indstil fødestrømningshastigheden til 5–10 MV/min, og ækvilibrer membranen med ækvilibreringsbuffer i mere end 5 MV, indtil membranen når fuld ligevægt.

5.3.2 Efter 0,22 μm for-filtrering påfyldes prøven på membranen, indtil prøvepåfyldningen er fuldført, eller den kromatografiske bindingskapacitet er nået.

5.3.3 Vask med ækvilibreringsbuffer i mere end 10 MV, indtil UV-signalet vender tilbage til basislinjen.

5.3.4 Påfør gradienteluering eller trinvis eluering i henhold til procesdesignet, og opsaml fraktioner efter behov.

5.4 CIP Post-Use Treatment – ​​Membran Chromatography Device CIP (Cleaning in Place)

5.4.1 Indstil tilførselsflowhastigheden til 5–10 MV/min, og udfør rensning med 1 M NaOH i mere end 10 MV, indtil UV-signalet falder til under basislinjen.

5.4.2 Efter cirkulation i 30 minutter, skift til vandvask, indtil pH når 7-8, og fortsæt derefter rengøring med 20 % ethanol, indtil ledningsevnen bliver næsten konstant.

5.5 Opbevaring af membrankromatografi

Efter brug og afslutning af CIP kan membranmodulet fjernes og opbevares ved iblødsætning i 20 % ethanol, eller det kan opbevares i-linje ved stuetemperatur i en opløsning indeholdende 20 % ethanol. 20 % ethanolopløsningen bør efterses og udskiftes med jævne mellemrum.

 

6. Bestillingsoplysninger

Q Stærk anionbyttermembrankromatografikapselfilter

	Lab skala	lille skala	pilotskala	produktionsskala
Produkt model	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Membranvolumen	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populære tags: cm svag ion-udvekslingsmembrankromatografi, Kina, leverandører, producenter, fabrik, engros, bulk, på lager, gratis prøve